連花清瘟如何抑制新冠?最新研究發(fā)現(xiàn)大黃酸等成分有顯著作用

中成藥連花清瘟正在治療新冠肺炎中發(fā)揮積極作用。據(jù)河北新聞網(wǎng)2月1日消息,以嶺藥業(yè)獨家生產(chǎn)的連花清瘟膠囊(顆粒)被《黑龍江省新型冠狀病毒肺炎中醫(yī)藥防治方案(2021版)》列為輕型、普通型患者臨床治療期的推薦中成藥。

截至目前,連花清瘟已被列入國家衛(wèi)健委發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案(試行第四至八版)》。

今年1月發(fā)表的最新藥理研究發(fā)現(xiàn),在人體測得的連花清瘟組分中,大黃酸、連翹苷A、連翹苷I、新綠原酸及其異構(gòu)體可能發(fā)揮抑制新冠病毒的潛在作用。

該研究作者為廈門大學(xué)藥學(xué)院吳彩勝副教授、海軍軍醫(yī)大學(xué)柴逸峰教授團(tuán)隊等,研究成果《基于人體暴露和ACE2生物色譜篩選中藥連花清瘟膠囊的抗COVID -19藥理活性成分》在藥學(xué)頂級期刊《藥學(xué)學(xué)報》發(fā)表。

研究團(tuán)隊表示,這是關(guān)于連花清瘟人體體內(nèi)成分的首次全面研究報告。

探索人體體內(nèi)的連花清瘟活性成分

中醫(yī)學(xué)是從上千年的臨床實踐中發(fā)展起來的學(xué)科,中藥研究從臨床研究入手,在安全劑量下直接開展人體暴露研究,將能夠更直觀地反映中藥的實際作用物質(zhì)基礎(chǔ)。

基于此,廈門大學(xué)藥學(xué)院吳彩勝副教授聯(lián)合海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院柴逸峰教授、陳嘯飛副教授團(tuán)隊、美國Mass Defect Technologies公司朱明社博士,以高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)處理技術(shù)和全二維共價固定化生物色譜分析系統(tǒng)為手段,從人體視角探究連花清瘟膠囊抗COVID-19的藥理活性成分及其作用機(jī)制。該文作為封面文章發(fā)表在《藥學(xué)學(xué)報》英文刊(Acta Pharmaceutica Sinica B)2021年第1期上,論文題目為《基于人體暴露和ACE2生物色譜篩選中藥連花清瘟膠囊的抗COVID-19藥理活性成分》(《Identifying potential anti-COVID-19 pharmacological components of traditional Chinese medicine Lianhuaqingwen capsule based on human exposure and ACE2 biochromatography screening》)。

連花清瘟如何抑制新冠?最新研究發(fā)現(xiàn)大黃酸等成分有顯著作用論文截圖

 

吳彩勝副教授,朱明社博士,柴逸峰教授為文章的共同通訊作者;海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院陳嘯飛副教授,廈門大學(xué)藥學(xué)院吳云龍教授,上海交通大學(xué)附屬上海第九人民醫(yī)院陳春博士為文章的并列第一作者。該研究工作得到國家自然科學(xué)基金、浙江大學(xué)新冠應(yīng)急專項、“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項、上海市青年科技啟明星等基金的支持。

論文顯示,該研究設(shè)計了一項單中心、隨機(jī)、開放、多劑量試驗,招募了14名健康受試者。試驗采用連續(xù)給藥(劑量為4.2 g,12粒膠囊)的方法,除第2天外,于第1天到8天給藥。此外,第1天和第2天,在給藥后取樣(血液和尿液);第3 天到7天,在每次給藥前采集血液樣本;第8天,在給藥前取樣(血液和尿液)。

該試驗要求受試者在給藥前1小時吃早餐,給藥前30分鐘內(nèi)飲用240ml溫開水,總體試驗期為11 天。

同化學(xué)藥相比,中藥研究最大的困難在于,中藥是一個復(fù)雜的體系,每味中藥都相當(dāng)于成百上千個化學(xué)藥物的集合。就連花清瘟膠囊而言,其組方由13味中藥組成:連翹、金銀花、炙麻黃、炒苦杏仁、石膏、板藍(lán)根、綿馬貫眾、魚腥草、廣藿香、大黃、紅景天、薄荷腦、甘草。該研究中,受試者經(jīng)多次口服給藥后,初步鑒定出的人體內(nèi)的連花清瘟組分共有86個。

那么,哪些成分具有抑制新冠病毒的作用呢?

研究團(tuán)隊通過全二維生物色譜分析系統(tǒng),篩選出連花清瘟提取物和人尿液樣品潛在的ACE2靶向成分。最終,找到了8種高暴露于人體且具有潛在ACE2靶向能力的連花清瘟膠囊成分:新綠原酸及其異構(gòu)體,苦杏仁苷,野黑櫻苷和連翹甙I,蘆丁,連翹苷A,甘草甜素和大黃酸。

然而,這種方法只是復(fù)雜化學(xué)樣本的初步篩選,候選活性成分和ACE2之間的相互作用參數(shù)還需進(jìn)一步確認(rèn)。

8名“種子選手”的三重篩選

確認(rèn)候選活性成分是否具有ACE2靶向作用至關(guān)重要。已有研究表明,篩選具有ACE2靶向能力的藥物,有望用于治療新冠肺炎患者。

該論文介紹,新冠病毒通過其刺突蛋白(S蛋白)與作為人受體的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)結(jié)合,從而感染人體。ACE2是一種負(fù)調(diào)節(jié)因子,具有維持腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)穩(wěn)定的能力,對所有器官的生理或病理至關(guān)重要。ACE2已被發(fā)現(xiàn)廣泛分布于心臟、腎臟、睪丸、脂肪組織、腦組織、血管平滑肌細(xì)胞,以及胃腸道。

為了確認(rèn)候選成分與ACE2間的相互關(guān)系,針對初步發(fā)現(xiàn)的8名“種子選手”,研究團(tuán)隊又進(jìn)行了三重篩選。

第一重篩選,研究團(tuán)隊對候選成分進(jìn)行了表面等離子分析(SPR),以驗證其對ACE2重組蛋白的親和力。這一輪中,苦杏仁苷和野黑櫻苷脫穎而出。

平衡解離常數(shù)KD值越大意味解離越多,候選成分與 ACE2的親和力越弱。研究發(fā)現(xiàn),苦杏仁苷(Amygdalin)和野黑櫻苷(Prunasin)具有較強(qiáng)的ACE2結(jié)合親和力,KD 值分別為0.221和0.268 μmol/L。野黑櫻苷是苦杏仁苷在體內(nèi)主要的代謝物,在人血清中的暴露量很高。

連花清瘟如何抑制新冠?最新研究發(fā)現(xiàn)大黃酸等成分有顯著作用表1.通過SPR分析獲得的靶向ACE2蛋白的候選活性成分的親和力。 論文附圖

 

甘草甜素(glycyrrhizin)曾被認(rèn)為是新冠肺炎的有效治療藥物,具有潛在的ACE2結(jié)合活性。這項研究確認(rèn)了甘草甜素的KD值為4.39 μmol/L。

連翹苷A(forsythoside A)和連翹苷I(forsythoside I)是連翹果實中的主要成分,其對ACE2的親和力被分別測定為15.8 and 18.7 μmol/L。大黃酸(rhein)是另一種在人血清中高暴露的組分,它對ACE2的親和力適中,KD值為33.3 μmol/L.。

第二重篩選,研究團(tuán)隊進(jìn)行了ACE2活性抑制試驗,通過ACE2抑制劑篩選試劑盒,測試了候選成分對ACE2活性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與ACE2結(jié)合親和力較強(qiáng)的兩個組分野黑櫻苷(prunasin)和甘草甜素(glycyrrhizin),均未表現(xiàn)出明顯的肽酶抑制作用,但是,大黃酸(Rhein)“表現(xiàn)突出”。

試驗發(fā)現(xiàn),大黃酸(Rhein)和大黃素-8-O-β-d-葡萄糖苷(emodin 8-O-β-d-glucoside)具有良好的ACE2抑制作用,IC50分別為18.33和22.50μmol/L,(如圖1C所示)。值得一提的是,大黃酸(rhein)在人體內(nèi)暴露程度高,具有良好的活性,這說明其可能是連花清瘟發(fā)揮ACE2抑制作用的主要活性成分。

連花清瘟如何抑制新冠?最新研究發(fā)現(xiàn)大黃酸等成分有顯著作用

圖1.候選成分對ACE2酶活性的抑制作用。

(A)陽性藥物MLN-4760

(B)連翹的候選成分

(C)大黃原植物

(D)金銀花/烤苦杏仁/甘草根

論文附圖

此外,試驗結(jié)果還顯示,三種連翹苷A、B和I,都具有ACE2抑制作用(如圖1B所示),三種綠原酸異構(gòu)體均表現(xiàn)出中等程度的ACE2抑制活性,IC50都在40μmol / L左右(如圖1D所示)。

研究團(tuán)隊認(rèn)為,連翹苷A和I,新綠原酸及其異構(gòu)體,都具有良好的體外活性,但體內(nèi)暴露低,它們可能與大黃素發(fā)揮協(xié)同作用。這或許反映了中藥的協(xié)同效應(yīng)。

第三重篩選,研究團(tuán)隊進(jìn)行了分子對接實驗,以研究6個代表性成分的結(jié)合位點。

實驗發(fā)現(xiàn),野黑櫻苷(prunasin)、連翹苷I(forsythoside I),甘草甜素(glycyrrhizin),大黃酸(rhein),連翹苷A(forsythoside A)和新綠原酸(neochlorogenic acid)這6種具有強(qiáng)親和力的組分,都能與ACE2和新冠病毒S蛋白結(jié)合界面形成恰當(dāng)?shù)目臻g互補(bǔ)(如圖2A-F所示)。

圖2.(A)野黑櫻苷、(B)連翹苷I、(C)甘草甜素、(D)大黃酸、(E)連翹苷A、(F)新綠原酸的分子對接結(jié)果。 論文附圖

圖2.(A)野黑櫻苷、(B)連翹苷I、(C)甘草甜素、(D)大黃酸、(E)連翹苷A、(F)新綠原酸的分子對接結(jié)果。 論文附圖

此前,大黃酸顯示出了最佳的ACE2抑制作用,分子對接則證明其羧基可與關(guān)鍵的肽酶活性位點Ala387結(jié)合,形成氫鍵。在大黃素-8-O-β-d-葡萄糖苷也觀察到了同樣的情況。

最終,三層篩選全部命中的4種候選活性成分為,大黃酸,連翹苷A、連翹苷I、新綠原酸及其異構(gòu)體。

研究團(tuán)隊總結(jié)道,這些成分不僅對ACE2表現(xiàn)出良好的親和力,而且能有效地結(jié)合到ACE2與S蛋白復(fù)合體的接觸面上;通過顯著影響新冠病毒S蛋白和人受體ACE2間的結(jié)合,其可能發(fā)揮抑制新冠病毒的潛在作用,這是防止病毒感染的重要途徑。

中西醫(yī)的碰撞,解密連翹與大黃

早在疫后初期,連花清瘟就被應(yīng)用于新冠肺炎的臨床治療,入選中藥抗疫的“三藥三方”,并被列入《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案(試行第四至八版)》。

連花清瘟的組方有13味中藥,連翹、金銀花、炙麻黃、炒苦杏仁、石膏、板藍(lán)根、綿馬貫眾、魚腥草、廣藿香、大黃、紅景天、薄荷腦、甘草。

單就一味連翹來看,連翹苷A和連翹苷I是連翹中的主要成分。上述最新藥理研究發(fā)現(xiàn),連翹苷A和連翹苷I都對ACE2蛋白具有良好的親和力,同時對其有抑制作用,分子對接則證實了它們可以與典型的酶活位點結(jié)合。

連花清瘟是一個復(fù)方中藥,其組方以漢代張仲景《傷寒論》中專治疫病的麻杏石甘湯與清代吳鞠通《溫病條辨》中專治疫病的銀翹散化裁,汲取明代吳又可《溫疫論》治疫證用大黃經(jīng)驗。

從中醫(yī)理論來講,大黃通腑泄肺,肺與大腸相表里,讓“疫毒”從大便排出,使邪有出路。明代吳又可曾指出,瘟疫治療宜在人體正氣未衰之時,及早攻逐邪氣,提前應(yīng)用通便的大黃,可以截斷病情向危重傳變。

上述最新藥理研究則進(jìn)一步證實了大黃酸良好的ACE2抑制作用,同時發(fā)現(xiàn)大黃酸在人血清中暴露濃度較高。

研究團(tuán)隊表示,本研究證明,基于人體暴露的方法可用于鑒定已證實有療效的草藥產(chǎn)品的藥理活性成分。據(jù)其所知,這是關(guān)于連花清瘟人體體內(nèi)成分的首次全面研究報告。

此前,已有研究在體外探索了連花清瘟的藥理活性。

2020年3月17日,中國工程院院士鐘南山團(tuán)隊的研究論文《連花清瘟對新型冠狀病毒具有抗病毒、抗炎作用》(《Lianhuaqingwen exerts anti-viral and anti-inflammatory activity against novel coronavirus (SARS-CoV-2)》),在《藥理學(xué)研究》(Pharmacological Research)在線刊出,這是中成藥有效抗新型冠狀病毒SARS-Cov-2的首篇基礎(chǔ)性研究文章。

該研究顯示,連花清瘟通過抑制病毒復(fù)制、引起病毒顆粒形體改變及抑制宿主細(xì)胞炎癥因子表達(dá),從而發(fā)揮抗新冠病毒活性的作用,為連花清瘟聯(lián)合現(xiàn)有治療手段治療COVID-2019的應(yīng)用提供了依據(jù)。

病毒性公共衛(wèi)生事件中,連花清瘟被多次采用

連花清瘟的研制始于非典。

據(jù)環(huán)球網(wǎng)此前報道,連花清瘟是2003年非典時期研發(fā)治療流感的創(chuàng)新中藥。面對SARS疫情,以嶺醫(yī)藥研究院院士專家團(tuán)隊組建針對SARS病毒的中藥科研組織,挖掘中醫(yī)藥治“疫”病,制定了連花清瘟處方。

連花清瘟于2004年5月上市,成為我國抗流感藥物中的新成員,并且把抑制SARS病毒的作用明確寫在了連花清瘟顆粒說明書中。

連花清瘟上市后,廣州呼吸疾病國家重點實驗室等科研院所研究證實,連花清瘟對甲型H1N1、H3N2、H5N1、H7N9、H9N2,乙型流感病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、手足口病病毒EV71、鼻病毒、皰疹病毒、柯薩奇病毒、MERS等均具有抑制作用。

2009年甲型H1N1流感大流行,相關(guān)研究證實,連花清瘟膠囊在抗病毒作用方面與奧司他韋沒有差異;在緩解流感癥狀,特別是退熱和緩解咳嗽、頭痛、肌肉酸痛和乏力等癥狀方面,連花清瘟膠囊優(yōu)于奧司他韋。

及至新冠疫情暴發(fā),連花清瘟再次被采用。

2020年4月12日,國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)連花清瘟膠囊/顆粒在原批準(zhǔn)適應(yīng)癥的基礎(chǔ)上,增加“新型冠狀病毒肺炎輕型、普通型”的新適應(yīng)癥。

上市十余年來,從甲型流感、乙型流感、禽流感到新冠肺炎等我國發(fā)生的病毒性重大公共衛(wèi)生事件中,連花清瘟多次被列入《流行性感冒診斷與治療指南》《人感染甲型H1N1流感診療方案》《乙型流感中醫(yī)藥防治方案》《人感染H7N9禽流感診療方案》《流行性感冒診療方案(2019年版)》《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案(試行第四至八版)》等診療方案。

據(jù)河北新聞網(wǎng)2月1日消息,日前,黑龍江省中醫(yī)藥管理局下發(fā)關(guān)于印發(fā)《黑龍江省新型冠狀病毒肺炎中醫(yī)藥防治方案(2021版)》的通知,該《方案》將以嶺藥業(yè)獨家生產(chǎn)的連花清瘟膠囊(顆粒)列為輕型、普通型患者臨床治療期的推薦中成藥。自新冠肺炎疫情發(fā)生以來,連花清瘟膠囊(顆粒)先后被20余省市的新冠肺炎診療方案推薦。

近一年的新冠大流行中,連花清瘟也在出海抗疫。

連花清瘟膠囊生產(chǎn)企業(yè)以嶺藥業(yè)(石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司)官網(wǎng)1月14日發(fā)布公告,近日,公司收到由烏茲別克斯坦衛(wèi)生部核準(zhǔn)簽發(fā)的藥物注冊批準(zhǔn)文件,批準(zhǔn)公司藥品連花清瘟膠囊符合烏茲別克斯坦藥物標(biāo)準(zhǔn)注冊。

該公告顯示,截至目前,連花清瘟膠囊已在烏茲別克斯坦、巴西、印度尼西亞、加拿大、莫桑比克、羅馬尼亞、泰國等19個國家分別以“中成藥”、“藥品”、“植物藥”、“天然健康產(chǎn)品”、“食品補(bǔ)充劑”、“現(xiàn)代植物藥”、“天然藥物”等身份注冊獲得上市許可。

(澎湃新聞記者 李季 實習(xí)生王彥琳對此文亦有貢獻(xiàn))

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頭部創(chuàng)傷多由銳器或鈍器導(dǎo)致,通常分為頭皮損傷、顱骨損傷和腦損傷三種,傷口不容易自行閉合。如果傷勢較輕,則會出現(xiàn)輕微的頭痛或腫脹。如果傷勢較重,則可能發(fā)生腦震蕩,嚴(yán)重時會導(dǎo)致傷者休克。頭部創(chuàng)傷有哪些典型表現(xiàn)呢?一、頭皮損傷。頭皮損傷主要包括頭皮血腫、頭皮裂傷和頭皮撕脫傷。頭皮血腫多因鈍器所致,按血腫出

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